培養(yǎng)基與菌種分離是從含有多種微生物的樣品中獲得純種微生物的操作技術(shù)。菌種分離主要在培養(yǎng)皿上進(jìn)行,常用的方法是稀釋法和劃線法。使用這兩種方法的目的是是微生物的一個(gè)個(gè)體通過繁殖,在固體培養(yǎng)基上長出肉眼能見的群體,根據(jù)培養(yǎng)特征,用接種針調(diào)取所需菌種并在顯微鏡下檢查,證明為單一形狀的菌體。常用的培養(yǎng)基是選擇培養(yǎng)基。
核糖核酸酶A(RNase A)來源于牛胰臟,是一種內(nèi)切核糖核酸酶,可特異攻擊RNA上嘧啶殘基的3’端,切割胞嘧啶或尿嘧啶與相鄰核苷酸形成的磷酸二酯鍵,反應(yīng)終產(chǎn)物是3’嘧啶核苷酸和末端帶3’嘧啶核苷酸的寡核苷酸。無輔助因子及二價(jià)陽離子存在時(shí),核糖核酸酶A的作用可以被胎盤RNA酶抑制劑(RNasin)或氧釩一核糖核苷復(fù)合物(vanadyl—ribonuclosidecomplex,VRC)所抑制。RNase A的反應(yīng)條件極廣,且極難失活。在低鹽濃度(0~100 mmol/l NaCl)下,RNase A切割單鏈和雙鏈RNA、DNA:RNA雜交體中的RNA;當(dāng)NaCl濃度為300 mmol/l?;蚋邥r(shí),RNase A就特異性切割單鏈RNA。去除反應(yīng)液中的RNase A,通常需要蛋白酶K處理、酚反復(fù)抽提和乙醇沉淀。
pH緩沖液是確保pH測(cè)量值精確的重要因素。標(biāo)準(zhǔn)緩沖液用于校準(zhǔn)pH 傳感器和檢查其性能。pH緩沖液的緩沖能力是其重要的屬性。即使將外部物質(zhì)加入緩沖液中,這一屬性仍可使pH緩沖液保持恒定的pH值。
標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(RM)reference material(RM):是一種已經(jīng)確定了具有一個(gè)或多個(gè)足夠均勻的特性值的物質(zhì)或材料,作為分析測(cè)量行業(yè)中的"量具",在校準(zhǔn)測(cè)量儀器和裝置、評(píng)價(jià)測(cè)量分析方法、測(cè)量物質(zhì)或材料特性值和考核分析人員的操作技術(shù)水平,以及在生產(chǎn)過程中產(chǎn)品的質(zhì)量控制等領(lǐng)域起著不可或缺的作用。
如果你的質(zhì)粒正好比較大,又沒有經(jīng)驗(yàn),選擇特別注明可以轉(zhuǎn)大質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染試劑成功幾率會(huì)高一些。有的轉(zhuǎn)染試劑還會(huì)提供一些促進(jìn)DNA凝聚的成分,使得DNA形成轉(zhuǎn)染復(fù)合物時(shí)更致密一些,更容易轉(zhuǎn)染一些。純化質(zhì)粒的質(zhì)量也會(huì)影響轉(zhuǎn)染效率,一定要選擇高質(zhì)量的質(zhì)粒。
Trizol試劑是直接從細(xì)胞或組織中提取總RNA的試劑。在樣品的裂解液或勻漿中,Trizol能保持RNA的完整性。加入氯/仿(CHCl3)后離心,樣品能分成水樣層和有機(jī)層。而RNA存在于水樣層中。在收集上面的水樣層后,RNA可以通過異丙醇沉淀的方法來還原。在除去水樣層之后,樣品中的核酸和蛋白也能相繼以沉淀的形式還原。乙醇沉淀能析出中間層的DNA,在有機(jī)層中加入異丙醇能析出有機(jī)層的蛋白。