大腸桿菌培養(yǎng):將接種完成的培養(yǎng)基放入恒溫培養(yǎng)箱或恒溫振蕩培養(yǎng)箱內進行培養(yǎng),即可得到所需的大腸桿菌菌落或種子液。
蛋白質的鹽析法:中性鹽對蛋白質的溶解度有顯著影響,一般在低鹽濃度下隨著鹽濃度升高,蛋白質的溶解度增加,此稱鹽溶;當鹽濃度繼續(xù)升高時,蛋白質的溶解度不同程度下降并先后析出,這種現象稱鹽析。
用Trizol法沉淀RNA容易有一些雜質的。部分色素是會和RNA一起沉下來。這種情況可以用75%冷的乙醇多洗幾遍。對后續(xù)qRT-PCR多數情況下沒什么影響。
常細胞生長得非??鞎r,pH值通常下降得很快。此時可以及時傳代、提高傳代比例或降低血清量等方法進行解決。此外,培養(yǎng)瓶蓋擰得太緊、NaHCO3 緩沖系統(tǒng)緩沖能力不夠、培養(yǎng)液中鹽濃度不正確、細菌、酵母或真菌污染等也能導致pH值通常下降得很快。
通常細胞體外培養(yǎng)時需要加入血清,以維持細胞的生長和存活。而除了血清之外,部分細胞在培養(yǎng)過程中需要添加胰島素和β-巰基乙醇等成分來維持細胞狀態(tài)。MCF-7和NIH:OVCAR-3等細胞需要額外添加胰島素,而Thp-1和MC3T3-E1 subclone 14等細胞則需要添加β-巰基乙醇,不同細胞加入量會有差異,需根據細胞類型判斷。