用途溫和裂解細(xì)胞提取總蛋白質(zhì),主要用于Western,免疫沉淀,免疫共沉淀等，非變性組織細(xì)胞裂解液
注意事項(xiàng)：主要由Triton X-100、氯化鈉、Tris組成,Triton X-100為最常用的去污劑之一。含有一支1.5ml PMSF。用本裂解液得到的蛋白樣品，可以用BCA蛋白定量試劑盒測(cè)定蛋白濃度。由于含有較高濃度的去垢劑，不能用Bradford法測(cè)定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。
儲(chǔ)存條件和保質(zhì)期—20℃,12個(gè)月

(一)貼壁培養(yǎng)細(xì)胞

1、取 Triton X-100 Lysi s Buffer 室溫溶解混勻，加入 PMSF，使 PMSF 終濃度為 1mM。

2、去培養(yǎng)液，用PBS、NS或無血清培養(yǎng)液清洗 1 次，低速離心，棄上清，留取沉淀。

3、按照6孔板每孔加入150～250μl含有PMSF 的裂解液的比例加入Triton X-100 Ly sis

Buffer。移液器輕輕吹打，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。置于冰上或 4℃裂解，通常裂解液作用于細(xì)胞1～3s內(nèi)，細(xì)胞就會(huì)被裂解。通常6孔板每孔細(xì)胞加入150μl 裂解液已經(jīng)足夠，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到 200～250μl。

4、10000～12000g，4℃離心5～10min(如無低溫離心機(jī)，室溫下離心亦可)，取上清。

5、進(jìn)行后續(xù)的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

(二)懸浮培養(yǎng)細(xì)胞

1、取Triton X-100 Lysi s Buffer 室溫溶解混勻，加入PMSF，使PMSF終濃度為1mM。

2、低速離心懸浮細(xì)胞，棄上清，收集沉淀。

3、用手指輕彈細(xì)胞，使其松散。按照6孔板每孔細(xì)胞加入150～250μl 含有PMSF的裂解液的比例，加入Leagene Triton X-100 Lysi s Buffer。通常6孔板每孔細(xì)胞加入150μl裂解液已經(jīng)足夠，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200～250μl。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞，充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。

4、10000～12000g， 4℃離心5～10min(如無低溫離心機(jī)，室溫下離心亦可)，取上清。

5、進(jìn)行后續(xù)的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

• 組織樣本

1、取TritonX-100LysisBuffer室溫溶解混勻后，加入PMSF，使PMSF終濃度為1mM。

2、把組織剪切成細(xì)小的碎片，越小越好。

3、取在液氮或超低溫冰箱中冷凍30min以上的組織，迅速用液氮研磨，研磨過程盡量控制在1～2min之內(nèi)，以減少蛋白的降解。

4、按照每20mg組織加入150～250μl裂解液的比例加入含有PMSF的裂解液。冰上或4℃裂解15～30min。

5、步驟3、4亦可以采用如下過程：按照每20mg組織加入150～250μl裂解液的比例加入含有PMSF的TritonX-100LysisBuffer。用玻璃勻漿器或組織研磨器勻漿，直至充分裂解，該過程盡量控制在1～2min之內(nèi)，以減少蛋白的降解。

6、10000～12000g，4℃離心5～10min(如無低溫離心機(jī)，室溫下離心亦可)，取上清。

7、進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。